Hücre kültürünün ana avantajlarından biri, hücre üremesinin fiziksel kimyasını (yani sıcaklık, pH, ozmotik basınç, O2 ve CO2 gerilimi) ve fizyolojik ortamı (yani hormon ve besin konsantrasyonu) manipüle etme yeteneğidir.Sıcaklığa ek olarak, kültür ortamı büyüme ortamı tarafından kontrol edilir.
Kültürün fizyolojik ortamı, fiziksel ve kimyasal ortamı kadar net olmasa da serum bileşenlerinin daha iyi anlaşılması, çoğalma için gerekli büyüme faktörlerinin tanımlanması ve kültürde hücrelerin mikroçevresinin daha iyi anlaşılması.(yani hücre-hücre etkileşimi, gaz difüzyonu, matriks ile etkileşim) artık belirli hücre hatlarının serumsuz ortamda kültürlenmesine izin vermektedir.
1. Kültür ortamı hücre büyümesini etkiler
Lütfen hücre kültürü koşullarının her hücre tipi için farklı olduğunu unutmayın.
Belirli bir hücre tipi için gerekli olan kültür koşullarından sapmanın sonuçları, anormal fenotiplerin ifadesinden hücre kültürünün tamamen başarısız olmasına kadar değişir.Bu nedenle, ilgilendiğiniz hücre hattına aşina olmanızı ve deneyinizde kullandığınız her ürün için verilen talimatları kesinlikle uygulamanızı öneririz.
2. Hücreleriniz için optimize edilmiş bir hücre kültürü ortamı oluşturmaya yönelik önlemler:
Kültür ortamı ve serum (daha fazla bilgi için aşağıya bakın)
pH ve CO2 seviyeleri (daha fazla bilgi için aşağıya bakın)
Plastik yetiştirin (daha fazla bilgi için aşağıya bakın)
Sıcaklık (daha fazla bilgi için aşağıya bakın)
2.1 Kültürel Medya ve Serum
Kültür ortamı, hücre büyümesi için gerekli besinleri, büyüme faktörlerini ve hormonları sağlaması, kültürün pH'ını ve ozmotik basıncını düzenlemesi nedeniyle kültür ortamının en önemli parçasıdır.
İlk hücre kültürü deneyleri, doku ekstraktları ve vücut sıvılarından elde edilen doğal ortamlar kullanılarak gerçekleştirilmesine rağmen, standardizasyon ihtiyacı, ortam kalitesi ve artan talep, kesin ortamların geliştirilmesine yol açmıştır.Üç temel ortam türü bazal ortam, indirgenmiş serum ortamı ve serumsuz ortamdır ve bunların serum takviyesi için farklı gereksinimleri vardır.
2.1.1 Temel ortam
Gibco hücre kültürü ortamı
Çoğu hücre dizisi, amino asitler, vitaminler, inorganik tuzlar ve karbon kaynakları (glikoz gibi) içeren temel ortamlarda iyi gelişir, ancak bu temel ortam formülasyonlarının serumla desteklenmesi gerekir.
2.1.2 Azaltılmış serum ortamı
Gibco Düşük Orta Serumlu Şişe
Hücre kültürü deneylerinde serumun olumsuz etkilerini azaltmak için başka bir strateji, serumu azaltılmış ortam kullanmaktır.Azaltılmış serum ortamı, gerekli serum miktarını azaltabilen, besinler ve hayvan kaynaklı faktörler açısından zengin temel bir ortam formülüdür.
2.1.3 Serumsuz besiyeri
Gibco serumsuz ortam içeren şişe
Serumsuz ortam (SFM), serumu uygun beslenme ve hormon formülasyonlarıyla değiştirerek hayvan serumu kullanımını ortadan kaldırır.Çin Hamsteri Yumurtalık (CHO) rekombinant protein üretim hattı, çeşitli hibridoma hücre hatları, böcek soyları Sf9 ve Sf21 (Spodoptera frugiperda) ve virüs üretimi için konak dahil olmak üzere birçok birincil kültür ve hücre dizisi serumsuz ortam formülasyonlarına sahiptir. (örneğin, 293, VERO, MDCK, MDBK), vb. Serumsuz bir ortam kullanmanın ana avantajlarından biri, büyüme faktörlerinin uygun bir kombinasyonunu seçerek ortamı belirli hücre türleri için seçici hale getirme yeteneğidir.Aşağıdaki tablo, serumsuz ortamın avantajlarını ve dezavantajlarını listeler.
avantaj
Netliği artırın
Daha tutarlı performans
Daha kolay saflaştırma ve sonraki işlemler
Hücre fonksiyonunu doğru bir şekilde değerlendirin
Üretkenliği artırın
Fizyolojik reaksiyonların daha iyi kontrolü
Gelişmiş hücre ortamı algılama
dezavantaj
Hücre tipine özel ortam formülü gereksinimleri
Daha yüksek reaktif saflığına ihtiyaç var
büyümede yavaşlama
2.2.1 pH seviyesi
Normal memeli hücre dizilerinin çoğu pH 7.4'te iyi gelişir ve farklı hücre dizileri arasındaki farklar küçüktür.Bununla birlikte, bazı dönüştürülmüş hücre dizilerinin hafif asidik bir ortamda (pH 7.0 – 7.4) daha iyi büyüdüğü, bazı normal fibroblast hücre dizilerinin ise hafif alkali bir ortamı (pH 7.4 – 7.7) tercih ettiği gösterilmiştir.Sf9 ve Sf21 gibi böcek hücre dizileri en iyi pH 6.2'de gelişir.
2.2.2 CO2 seviyesi
Büyüme ortamı, kültürün pH'ını kontrol eder ve kültürdeki hücreleri pH'taki değişikliklere karşı koymaları için tamponlar.Genellikle bu tamponlama, organik (örneğin HEPES) veya CO2-bikarbonat bazlı tamponlar kullanılarak sağlanır.Ortamın pH'ı, çözünmüş karbondioksit (CO2) ve bikarbonatın (HCO3-) hassas dengesine bağlı olduğundan, atmosferik CO2'deki değişiklikler ortamın pH'ını değiştirecektir.Bu nedenle, CO2-bikarbonat bazlı bir tamponla tamponlanmış bir ortam kullanırken, özellikle açık kültür tabaklarında hücrelerin kültürlenmesinde veya yüksek konsantrasyonlarda transforme hücre hatlarının kültürlenmesinde eksojen CO2 kullanılması gerekir.Çoğu araştırmacı genellikle havada %5-7 CO2 kullansa da, çoğu hücre kültürü deneyi genellikle %4-10 CO2 kullanır.Bununla birlikte, doğru pH ve ozmotik basınca ulaşmak için her ortamın tavsiye edilen bir CO2 gerilimi ve bikarbonat konsantrasyonu vardır;daha fazla bilgi için lütfen ortam üreticisinin talimatlarına bakın.
2.3 Plastik yetiştirmek
Hücre kültürü plastikleri, çeşitli hücre kültürü uygulamalarına uyacak şekilde çeşitli biçimlerde, boyutlarda ve yüzeylerde mevcuttur.Hücre kültürü uygulamanız için doğru plastiği seçmenize yardımcı olması için aşağıdaki hücre kültürü plastik yüzey kılavuzunu ve hücre kültürü kabı kılavuzunu kullanın.
Tüm Thermo Scientific Nunc hücre kültürü plastiklerini görüntüleyin (reklam bağlantısı)
2.4 Sıcaklık
Hücre kültürü için optimal sıcaklık, büyük ölçüde hücrelerin izole edildiği konakçının vücut sıcaklığına ve daha az ölçüde sıcaklıktaki anatomik değişikliklere bağlıdır (örneğin, deri sıcaklığı iskelet kasınınkinden daha düşük olabilir). ).Hücre kültürü için Aşırı ısınma, aşırı ısınmadan daha ciddi bir sorundur.Bu nedenle, inkübatördeki sıcaklık genellikle optimum sıcaklığın biraz altına ayarlanır.
2.4.1 Çeşitli hücre hatları için optimum sıcaklık
Çoğu insan ve memeli hücre dizisi, optimum büyüme için 36°C ila 37°C'de tutulur.
Böcek hücreleri, optimum büyüme için 27°C'de yetiştirilir;daha düşük sıcaklıklarda ve 27°C ile 30°C arasındaki sıcaklıklarda daha yavaş büyürler.30°C'nin üzerinde böcek hücrelerinin canlılığı azalır, 27°C'ye dönse bile hücreler iyileşmez.
Kuş hücre dizilerinin maksimum büyümeye ulaşması için 38.5°C'ye ihtiyacı vardır.Bu hücreler 37°C'de tutulabilse de, daha yavaş büyürler.
Soğukkanlı hayvanlardan (amfibiler, soğuk su balıkları gibi) türetilen hücre hatları, 15°C ila 26°C gibi geniş bir sıcaklık aralığını tolere edebilir.
Gönderim zamanı: Şubat-01-2023