Hücre kültürlerinin kontaminasyonu, hücre kültürü laboratuvarlarında kolayca en yaygın sorun haline gelebilir ve bazen çok ciddi sonuçlara neden olabilir.Hücre kültürü kontaminantları, ortam, serum ve su safsızlıkları, endotoksinler, plastikleştiriciler ve deterjanlar gibi kimyasal kontaminantlar ve bakteri, küf, maya, virüs, mikoplazma çapraz enfeksiyonu gibi biyolojik kontaminantlar olmak üzere iki kategoriye ayrılabilir.Diğer hücre hatları tarafından kontamine olmuş.Kontaminasyonu tamamen ortadan kaldırmak imkansız olsa da, kaynağının tam olarak anlaşılması ve iyi aseptik tekniklerin izlenmesi ile sıklığı ve şiddeti azaltılabilir.
1.Bu bölüm, başlıca biyolojik kirlenme türlerini özetlemektedir:
Bakteriyel kontaminasyon
Küf ve virüs kontaminasyonu
Mikoplazma kontaminasyonu
maya kontaminasyonu
1.1Bakteri kontaminasyonu
Bakteriler, her yerde bulunan tek hücreli mikroorganizmaların büyük bir grubudur.Genellikle sadece birkaç mikron çapındadırlar ve kürelerden çubuklara ve spirallere kadar çeşitli şekillerde olabilirler.Her yerde bulunmaları, boyutları ve hızlı büyüme hızları nedeniyle bakteriler, mayalar ve küflerle birlikte hücre kültüründe en yaygın biyolojik kirletici maddelerdir.
1.1.1 Bakteriyel Kontaminasyonun Tespiti
Bakteriyel kontaminasyon, kültürün enfekte olmasından sonraki birkaç gün içinde görsel olarak incelenmesiyle kolayca tespit edilir;
Enfekte kültürler genellikle bulutlu (yani bulanık) görünür ve bazen yüzeyde ince bir film tabakası bulunur.
Kültür ortamının pH değerindeki ani düşüşlere de sıklıkla rastlanır.
Düşük güçlü bir mikroskop altında, bakteriler hücreler arasında küçük, hareketli granüller olarak görünür ve yüksek güçlü bir mikroskop altında gözlem, tek tek bakterilerin şekillerini çözebilir.
1.2Küf ve Virüs bulaşması
1.2.1 Küf Kirlenmesi
Küfler, mantar krallığının hif adı verilen çok hücreli filamentler şeklinde büyüyen ökaryotik mikroorganizmalarıdır.Bu çok hücreli filamanların bağlayıcı ağları, koloniler veya miselyum adı verilen genetik olarak aynı çekirdekleri içerir.
Maya kontaminasyonuna benzer şekilde, kültürün pH'ı kontaminasyonun ilk aşamasında sabit kalır ve daha sonra kültür daha ciddi bir şekilde enfekte olduğunda ve bulanıklaştıkça hızla artar.Mikroskop altında, miselyum genellikle ipliksi, bazen yoğun spor kümeleri şeklindedir.Pek çok küfün sporları, uyku evrelerinde son derece sert ve yaşanması zor ortamlarda hayatta kalabilir ve yalnızca doğru büyüme koşulları ile karşılaşıldığında aktif hale gelir.
1.2.2 Virüs Bulaşması
Virüsler, konakçı hücrenin üreme mekanizmasını devralan mikroskobik enfeksiyöz ajanlardır.Son derece küçük boyutları, kültürde tespit edilmelerini ve hücre kültürü laboratuvarlarında kullanılan reaktiflerden uzaklaştırılmalarını zorlaştırır.Çoğu virüsün konakçıları için çok katı gereksinimleri olduğundan, genellikle konakçı dışındaki türlerin hücre kültürlerini olumsuz etkilemezler.
Bununla birlikte, virüs bulaşmış hücre kültürlerinin kullanımı, özellikle laboratuvarda insan veya primat hücreleri yetiştiriliyorsa, laboratuvar personelinin sağlığı için ciddi bir risk oluşturabilir.
Hücre kültürlerindeki viral enfeksiyon, elektron mikroskobu, bir dizi antikorla immün boyama, ELISA veya uygun viral primerlerle PCR ile saptanabilir.
1.3Mikoplazma kontaminasyonu
Mikoplazmalar, hücre duvarları olmayan basit bakterilerdir ve kendi kendini kopyalayabilen en küçük organizmalar oldukları düşünülmektedir.Son derece küçük boyutlarından (genellikle 1 mikrondan küçük) dolayı, mikoplazmanın çok yüksek yoğunluklara ulaşana ve hücre kültürlerinin bozulmasına neden olana kadar tespit edilmesi zordur;O zamana kadar, genellikle belirgin bir enfeksiyon belirtisi yoktur.
1.3.1 Mikoplazma kontaminasyonunun tespiti
Bazı yavaş büyüyen mikoplazmalar, hücre ölümüne neden olmadan kültürlerde kalabilirler, ancak kültürlerdeki konakçı hücrelerin davranışını ve metabolizmasını değiştirirler.
Kronik mikoplazma enfeksiyonu, süspansiyon kültüründe azalmış hücre proliferasyon hızı, azalmış satürasyon yoğunluğu ve aglütinasyon ile karakterize edilebilir.
Bununla birlikte, mikoplazma kontaminasyonunu tespit etmenin tek güvenilir yolu, kültürü floresan boyama (örn., Hoechst 33258), ELISA, PCR, immün boyama, otoradyografi veya mikrobiyal test kullanarak düzenli olarak test etmektir.
1.4 Maya kontaminasyonu
Mayalar, birkaç mikron (genellikle) ila 40 mikron (nadiren) arasında değişen, mantar krallığının tek hücreli ökaryotlarıdır.
1.4.1 Maya kontaminasyonunun tespiti
Bakteriyel kontaminasyonda olduğu gibi, özellikle kontaminasyon ileri bir aşamadaysa, maya ile kontamine olmuş kültürler bulanıklaşabilir.Maya ile kontamine olmuş kültürlerin pH'ı, kontaminasyon daha şiddetli hale gelene kadar çok az değişir ve bu aşamada pH genellikle yükselir.Mikroskop altında maya, bireysel oval veya küresel parçacıklar olarak görünür ve daha küçük parçacıklar üretebilir.
2. Çapraz enfeksiyon
Mikrobiyal kontaminasyon kadar yaygın olmasa da, birçok hücre hattının HeLa ve diğer hızlı büyüyen hücre hatları ile kapsamlı çapraz kontaminasyonu, ciddi sonuçları olan, açıkça tanımlanmış bir sorundur.Saygın hücre bankalarından hücre dizileri edinin, hücre dizilerinin özelliklerini düzenli olarak kontrol edin ve iyi aseptik teknikler kullanın.Bu uygulamalar çapraz bulaşmayı önlemenize yardımcı olacaktır.DNA parmak izi, karyotipleme ve izotipleme, hücre kültürünüzde çapraz kontaminasyon olup olmadığını doğrulayabilir.
Mikrobiyal kontaminasyon kadar yaygın olmasa da, birçok hücre hattının HeLa ve diğer hızlı büyüyen hücre hatları ile kapsamlı çapraz kontaminasyonu, ciddi sonuçları olan, açıkça tanımlanmış bir sorundur.Saygın hücre bankalarından hücre dizileri edinin, hücre dizilerinin özelliklerini düzenli olarak kontrol edin ve iyi aseptik teknikler kullanın.Bu uygulamalar çapraz bulaşmayı önlemenize yardımcı olacaktır.DNA parmak izi, karyotipleme ve izotipleme, hücre kültürünüzde çapraz kontaminasyon olup olmadığını doğrulayabilir.
Gönderim zamanı: Şubat-01-2023